一、前言

本文所述重組胰島素類產(chǎn)品是指以重組生物技術(shù)制造的人胰島素、人胰島素序列突變體及其脂肪酸修飾物等。該類產(chǎn)品總體上具有結(jié)構(gòu)特征明確、作用機(jī)制清晰等特點(diǎn)，是控制和治療糖尿病的主要藥物之一。

本指導(dǎo)原則旨在基于當(dāng)前的科學(xué)認(rèn)知和審評(píng)認(rèn)識(shí)，明確胰島素類產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)中的共性技術(shù)要求。申請(qǐng)人亦可根據(jù)藥物研發(fā)的實(shí)際情況，在符合藥物研發(fā)規(guī)律的前提下，采用更有效的方法和手段對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行深入研究，及時(shí)與監(jiān)管機(jī)構(gòu)進(jìn)行溝通交流，并在申報(bào)資料中說明其科學(xué)合理性。隨著科學(xué)認(rèn)知和技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則的相關(guān)內(nèi)容將不斷更新完善。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則主要為采用重組技術(shù)制備的胰島素類產(chǎn)品的創(chuàng)新藥和生物類似藥的臨床階段和上市階段藥學(xué)研究提供技術(shù)指導(dǎo)。根據(jù)制劑特點(diǎn)，本指導(dǎo)原則包括以下 3 類：

1、胰島素、胰島素類似物及脂肪酸鏈修飾胰島素，如人胰島素、甘精胰島素、門冬胰島素、賴脯胰島素、谷賴胰島素、地特胰島素和德谷胰島素等。

2、雙時(shí)相預(yù)混胰島素，一般由速效/短效胰島素或胰島素類似物與中效胰島素或胰島素類似物按一定比例混合而成，如門冬胰島素 30 /門冬胰島素 50 /門冬胰島素 70、精蛋白鋅重組賴脯胰島素 25R/精蛋白鋅重組賴脯胰島素50R、精蛋白人胰島素/精蛋白人胰島素（30R）/精蛋白人胰島素（50R）等。

3、復(fù)方胰島素，在單一制劑中含兩個(gè)或兩個(gè)以上活性成分的胰島素制劑，如德谷門冬雙胰島素。另外，胰島素與其他分子組成的復(fù)方制劑（如德谷胰島素/利拉魯肽、甘精胰島素/利司那肽等）以及經(jīng)其他改構(gòu)設(shè)計(jì)或化學(xué)修飾的產(chǎn)品，其胰島素部分的研究可酌情參考本指導(dǎo)原則。

三、一般原則

胰島素類產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)過程應(yīng)基于“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”的理念，對(duì)生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行全面而充分的研究，建立全生命周期質(zhì)量管理體系，確保產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控。同時(shí)，由于該類產(chǎn)品存在用藥頻次較高、周期較長等特點(diǎn)，應(yīng)更加重視對(duì)雜質(zhì)的控制。本指導(dǎo)原則適用的胰島素類產(chǎn)品，如按生物類似藥開發(fā)，藥學(xué)研究應(yīng)符合生物類似藥研發(fā)與評(píng)價(jià)相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則的要求。目前胰島素類產(chǎn)品多為注射劑，隨著新技術(shù)的發(fā)展，未來可能出現(xiàn)口服劑型、吸入劑型或采用其他遞送系統(tǒng)的胰島素類產(chǎn)品，建議參考更新的相關(guān)技術(shù)要求開展研究。

四、生產(chǎn)用原材料

生產(chǎn)用原材料是影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。用于胰島素類產(chǎn)品生產(chǎn)的原材料應(yīng)符合《中國藥典》相關(guān)要求，結(jié)合胰島素類產(chǎn)品的特點(diǎn)，分析判斷各類原材料對(duì)產(chǎn)品的安全性、有效性和質(zhì)量可控性的潛在影響，例如是否參與原料藥的分子構(gòu)成、使用工藝步驟與終產(chǎn)品的距離(即步驟數(shù))等，基于科學(xué)和風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)對(duì)生產(chǎn)用原材料進(jìn)行分類管理，建立全面的控制體系。應(yīng)明確生產(chǎn)用原材料的來源，嚴(yán)格供應(yīng)商審計(jì)，確保其質(zhì)量以及供應(yīng)鏈穩(wěn)定，并制定合理的內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1. 生產(chǎn)用種子庫/細(xì)胞庫

用于胰島素類產(chǎn)品生產(chǎn)的菌株（細(xì)胞株）應(yīng)符合《中國藥典》及 ICH Q5B、ICH Q5D 要求。關(guān)于生產(chǎn)用菌株（細(xì)胞株）的構(gòu)建，應(yīng)明確描述其目的基因、表達(dá)載體、宿主菌（細(xì)胞）的來源，說明工程菌株（細(xì)胞株）和三級(jí)種子庫（細(xì)胞庫）的構(gòu)建與檢定過程。工程菌株（細(xì)胞株）在構(gòu)建過程中應(yīng)盡量避免使用攜帶 β-內(nèi)酰胺類抗生素抗性基因的質(zhì)粒；單克隆篩選操作應(yīng)在獲得原始種子庫前完成，主種子庫、工作種子庫建立及復(fù)蘇用于生產(chǎn)時(shí)應(yīng)避免劃線挑取單克隆，以確保各級(jí)、各批次種子庫（細(xì)胞庫）之間的均一性及產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。細(xì)胞庫檢定項(xiàng)目應(yīng)涵蓋生物學(xué)特性、生化特性、分子遺傳特性和外源因子污染等。種子庫（細(xì)胞庫）的傳代穩(wěn)定性研究應(yīng)采用代表性生產(chǎn)工藝進(jìn)行，并在實(shí)際工藝中進(jìn)行確認(rèn)，應(yīng)根據(jù)所使用的表達(dá)體系對(duì)基因穩(wěn)定性、遺傳拷貝數(shù)、質(zhì)粒保有率、表達(dá)量、活力、外源因子污染等展開研究，合理擬定各級(jí)種子庫（細(xì)胞庫）的限傳代次。對(duì)于原核表達(dá)系統(tǒng)，還應(yīng)加強(qiáng)各級(jí)種子庫及生產(chǎn)全過程噬菌體及其他外源因子的檢測(cè)及控制。

2.化學(xué)分子修飾物

胰島素類產(chǎn)品的化學(xué)分子修飾物參與最終分子組成，是改變胰島素類產(chǎn)品藥代動(dòng)力學(xué)行為的重要因素之一，應(yīng)被視為關(guān)鍵中間體。所用的化學(xué)分子修飾物多為脂肪酸側(cè)鏈，來源包括自制、委托生產(chǎn)或購買商業(yè)化產(chǎn)品等。應(yīng)盡早確定化學(xué)分子修飾物的制備工藝或供應(yīng)商，確保批間質(zhì)量一致以及臨床試驗(yàn)樣品的代表性?？筛鶕?jù)其結(jié)構(gòu)特征及制備工藝，充分評(píng)估其質(zhì)量對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性和質(zhì)量可控性的潛在影響，重點(diǎn)關(guān)注雜質(zhì)的控制，如工藝雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、遺傳毒性雜質(zhì)、有機(jī)溶劑和元素雜質(zhì)等。當(dāng)化學(xué)分子修飾物發(fā)生變更（如來源、生產(chǎn)工藝）時(shí)，需結(jié)合產(chǎn)品的開發(fā)階段、變更的風(fēng)險(xiǎn)等充分評(píng)估變更對(duì)終產(chǎn)品的影響，制定合理的可比性研究策略，進(jìn)行充分的可比性研究。 

2.1生產(chǎn)工藝

對(duì)化學(xué)分子修飾物，其制備用起始物料的選擇應(yīng)參考ICH Q11 和相關(guān)技術(shù)要求，建立合理的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)；對(duì)關(guān)鍵的工藝中間體擬定合理的控制標(biāo)準(zhǔn)。

2.2結(jié)構(gòu)確證

可參考化學(xué)原料藥相關(guān)技術(shù)指南的要求，結(jié)合工藝路線，采用多種分析測(cè)試方法對(duì)小分子修飾物化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行構(gòu)研究，對(duì)含有立體構(gòu)型的化學(xué)分子修飾物，可采用單晶 X 衍射、核磁共振等手段進(jìn)行立體結(jié)構(gòu)的確證研究。

2.3質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)胰島素類產(chǎn)品質(zhì)量控制要求，結(jié)合化學(xué)分子修飾物制備工藝，合理擬定化學(xué)分子修飾物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制項(xiàng)目、方法和限度。對(duì)于潛在的、具有遺傳毒性的雜質(zhì)可按照 ICH M7 的要求進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和控制。

2.4穩(wěn)定性

應(yīng)參照 ICH 和化學(xué)藥等相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行研究，擬定合理的貯藏條件和復(fù)驗(yàn)期。

3.其他生產(chǎn)用原材料

應(yīng)特別關(guān)注生產(chǎn)用原材料中的動(dòng)物源性組分，充分評(píng)估其生物安全方面的潛在風(fēng)險(xiǎn)。例如，生產(chǎn)過程中應(yīng)盡量避免使用動(dòng)物來源的蛋白酶，鼓勵(lì)使用重組表達(dá)蛋白酶。生產(chǎn)過程中若使用蛋白酶，應(yīng)提供其必要的生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究資料，特別關(guān)注蛋白酶的純度、比活等關(guān)鍵質(zhì)量屬性的批間一致性以及生產(chǎn)過程中可能存在的抗生素、宿主 DNA、宿主蛋白等的殘留控制，合理擬定蛋白酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

此外，若一種關(guān)鍵生產(chǎn)用原材料存在多個(gè)供應(yīng)商，應(yīng)充分研究比對(duì)不同供應(yīng)商來源的原材料對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的潛在影響，并開展必要的可比性研究，優(yōu)選優(yōu)用。

五、生產(chǎn)工藝

胰島素類產(chǎn)品應(yīng)遵循重組蛋白類產(chǎn)品生產(chǎn)工藝開發(fā)的一般規(guī)律。對(duì)于按照創(chuàng)新藥開發(fā)的胰島素類產(chǎn)品，鼓勵(lì)采用擬商業(yè)化生產(chǎn)工藝和規(guī)模樣品用于確證性臨床研究。對(duì)于按照生物類似藥開發(fā)的胰島素類產(chǎn)品，在臨床試驗(yàn)申報(bào)階段應(yīng)采用與商業(yè)化生產(chǎn)階段可對(duì)接的工藝和規(guī)模，并在關(guān)鍵臨床試驗(yàn)開始前鎖定商業(yè)化生產(chǎn)工藝和規(guī)模以支持臨床試驗(yàn)樣品、商業(yè)化產(chǎn)品與參照藥的可比性/相似性評(píng)價(jià)中物質(zhì)基礎(chǔ)的一致性。圍繞參照藥的目標(biāo)質(zhì)量概況（QTPP）和關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA），通過完善的工藝研究，確定合理的工藝步驟、工藝參數(shù)和中間控制項(xiàng)目及限度，并開展充分的工藝驗(yàn)證研究。

（一）生產(chǎn)工藝開發(fā)

1. 原料藥

1.1 發(fā)酵及酶切工藝

考慮到高密度培養(yǎng)和連續(xù)生產(chǎn)技術(shù)等新技術(shù)的出現(xiàn)，胰島素類產(chǎn)品的表達(dá)量較以往有一定的提高，對(duì)于該類產(chǎn)品的發(fā)酵規(guī)模應(yīng)結(jié)合表達(dá)系統(tǒng)、產(chǎn)品復(fù)雜性、產(chǎn)能需求等合理設(shè)計(jì)。胰島素類產(chǎn)品生產(chǎn)規(guī)模放大時(shí)，由于工藝參數(shù)變化、設(shè)備差異或生產(chǎn)環(huán)境復(fù)雜性可能導(dǎo)致雜質(zhì)的水平增加，為保證不同臨床試驗(yàn)階段及上市階段產(chǎn)品質(zhì)量可對(duì)接，應(yīng)盡早規(guī)劃設(shè)計(jì)以減少臨床期間至上市階段發(fā)生工藝重大變更對(duì)產(chǎn)品安全有效性的影響。生產(chǎn)發(fā)酵過程中需要關(guān)注外源因子污染的風(fēng)險(xiǎn)。若適用，應(yīng)對(duì)生產(chǎn)過程中可能引入噬菌體污染的環(huán)節(jié)（如菌株、培養(yǎng)基等）進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，明確高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)，擬定合理的控制措施。若以胰島素類前體的形式表達(dá)，胰島素類產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝中通常需引入酶切步驟。在開展酶切步驟的表征研究時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注酶的添加比例、反應(yīng)溫度、反應(yīng)體系組成、反應(yīng)時(shí)間等工藝參數(shù)對(duì)工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量的影響，建立產(chǎn)品質(zhì)量和工藝的相關(guān)性。

1.2 修飾工藝

對(duì)于脂肪酸鏈修飾胰島素類藥物，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)脂肪酸鏈等與胰島素中間體連接反應(yīng)的反應(yīng)機(jī)理確定生產(chǎn)工藝，保證反應(yīng)的可行性和合理性；關(guān)注在擬定的反應(yīng)條件下，雜質(zhì)與胰島素中間體的連接反應(yīng)是否可能發(fā)生，明確可能引入的副產(chǎn)物。應(yīng)采用科學(xué)的方法進(jìn)行工藝表征，明確修飾反應(yīng)各參數(shù)如反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、pH、蛋白/化學(xué)分子投料比例、物料濃度、投料順序、投料速率及攪拌轉(zhuǎn)速（若涉及）、放置等，明確工藝性能（如修飾反應(yīng)率、副產(chǎn)物、蛋白回收率等）和對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。 

1.3 結(jié)晶及干燥工藝

胰島素類產(chǎn)品的結(jié)晶及干燥工藝是影響其穩(wěn)定性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。申請(qǐng)人應(yīng)明確采用的結(jié)晶工藝（等電點(diǎn)沉淀法、鋅離子誘導(dǎo)結(jié)晶法等）及干燥工藝（冷凍干燥、噴霧干燥等），工藝驗(yàn)證時(shí)需特別關(guān)注結(jié)晶收率及干燥前后的純度、外觀、水分等的變化。應(yīng)規(guī)范開展工藝表征研究，明確關(guān)鍵工藝參數(shù)與產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性之間的相關(guān)性（特別是原料藥/原液的結(jié)晶、添加制備物料的順序、pH 調(diào)節(jié)等）。結(jié)合研究結(jié)果，明確關(guān)鍵工藝參數(shù)，合理設(shè)置過程控制項(xiàng)目及可接受標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 抗生素的使用

胰島素類產(chǎn)品的生產(chǎn)過程應(yīng)盡量避免使用抗生素。根據(jù)《中國藥典》要求，除另有規(guī)定外，生產(chǎn)過程中不得使用青霉素或其他 β-內(nèi)酰胺類抗生素。若種子復(fù)蘇擴(kuò)增階段需添加抗生素，應(yīng)選擇安全性風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較低的抗生素，種類不超過一種，且應(yīng)充分驗(yàn)證后續(xù)生產(chǎn)工藝對(duì)抗生素的去除能力和效果，并在原液或制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)抗生素殘留量進(jìn)行嚴(yán)格控制，應(yīng)符合《中國藥典》要求。

2. 制劑

2.1 制劑處方及輔料

由于不同來源輔料的質(zhì)量對(duì)制劑的質(zhì)量具有重要影響，創(chuàng)新藥及生物類似藥均應(yīng)開展必要的處方篩選研究。對(duì)于多劑量產(chǎn)品中抑菌劑種類和含量的確定，應(yīng)參照《中國藥典》規(guī)定方法開展研究，結(jié)合穩(wěn)定性研究結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)估，盡可能降低抑菌劑使用量，應(yīng)達(dá)到《中國藥典》的要求。原則上，生物類似藥處方應(yīng)與參照藥保持一致，抑菌效力不得低于參照藥。胰島素類產(chǎn)品制劑的構(gòu)象狀態(tài)可能會(huì)影響穩(wěn)定性，故工藝開發(fā)時(shí)，應(yīng)采用合適的方法（如 AUC）研究制劑中胰島素六聚體的構(gòu)象狀態(tài)，對(duì)于生物類似藥還應(yīng)對(duì)比候選藥與參照藥構(gòu)象狀態(tài)（如六聚體等）的異同。

若實(shí)際生產(chǎn)中活性成分或輔料涉及過量投料，應(yīng)參照《中國藥典》、 ICH Q8 (R2)的要求進(jìn)行相關(guān)研究，并說明超過的量、過量的理由及合理性等。結(jié)合制劑處方研究，需明確輔料生產(chǎn)商/供應(yīng)商、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、檢定情況等信息，嚴(yán)格做好生產(chǎn)商/供應(yīng)商審計(jì)工作。所用輔料一般不得低于藥用級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。擬采用多家供應(yīng)商提供輔料的，需對(duì)不同輔料制備的制劑進(jìn)行必要的可比性研究，優(yōu)選優(yōu)用。 

2.2 制劑工藝

胰島素類產(chǎn)品除遵循常規(guī)重組蛋白類產(chǎn)品的一般性要求外，對(duì)特殊類型的制劑需重點(diǎn)關(guān)注以下方面。雙時(shí)相預(yù)混胰島素：雙時(shí)相預(yù)混胰島素類產(chǎn)品由于硫酸魚精蛋白在處方中的特殊性和重要性，考慮不同來源及不同批次的硫酸魚精蛋白與胰島素的結(jié)合能力不同，應(yīng)嚴(yán)格控制硫酸魚精蛋白的來源及質(zhì)量，使用前規(guī)范開展等相點(diǎn)研究。等相點(diǎn)是使一定量的胰島素完全被結(jié)合形成沉淀的最小魚精蛋白量，可結(jié)合制劑處方、參考?xì)W洲藥典等指南開展研究。對(duì)于按生物類似藥開發(fā)的候選藥需與參照藥進(jìn)行魚精蛋白含量的頭對(duì)頭對(duì)比研究，關(guān)注沉降、粒度分布、再懸浮能力等指標(biāo)，以保證胰島素類產(chǎn)品質(zhì)量的批間一致性及相似性。對(duì)于創(chuàng)新藥，可參照上述指標(biāo)開展研究。

復(fù)方制劑：說明不同活性成分比例和規(guī)格的合理性。如果復(fù)方制劑有多種處方比例或多種規(guī)格，應(yīng)對(duì)每種處方比例或多種規(guī)格進(jìn)行合理性評(píng)估。處方開發(fā)時(shí)，應(yīng)說明活性成分之間、活性成分與輔料間在物理和化學(xué)特性方面具有相容性，或采用特殊的制劑技術(shù)解決不相容問題。應(yīng)開展每個(gè)活性成分、制劑、輔料在加速和/或強(qiáng)制降解條件下變化研究，明確活性成分之間、活性成分與輔料之間的相互作用，是否產(chǎn)生新雜質(zhì)，進(jìn)而明確雜質(zhì)的來源、峰歸屬，為儲(chǔ)存條件及質(zhì)量控制建立基礎(chǔ)。

（二）關(guān)鍵工藝參數(shù)和過程控制

臨床試驗(yàn)申報(bào)時(shí)，建議對(duì)關(guān)鍵工藝參數(shù)和產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性間的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行研究，特別是原料藥結(jié)晶、制劑生產(chǎn)物料加入順序、pH 調(diào)節(jié)等對(duì)產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性具有潛在影響的工藝步驟。一般需依據(jù)工藝開發(fā)和多批次原料藥及制劑生產(chǎn)階段的工藝監(jiān)控信息，明確關(guān)鍵步驟及關(guān)鍵工藝參數(shù)，擬訂合理的中間控制項(xiàng)目及限度。對(duì)于必要的臨床試驗(yàn)期間的變更，需開展充分的工藝、質(zhì)量和穩(wěn)定性可比性研究。

（三）生產(chǎn)工藝驗(yàn)證

分批與混批考慮：胰島素類產(chǎn)品發(fā)酵規(guī)模通常較大，下游純化不同步驟由于設(shè)備處理能力不同，可能會(huì)涉及分批與混批（例如層析步驟設(shè)備處理能力有限，通常需分批進(jìn)行，溶解、過濾等可混批進(jìn)行）制備原料藥，不同批次原料藥也可能混批制備制劑，為確保生產(chǎn)的可控性和可銜接性，上游培養(yǎng)、下游純化和制劑工藝的規(guī)模應(yīng)盡量匹配，以保證工藝穩(wěn)健性和產(chǎn)品的批間一致性，并滿足上市后的持續(xù)供應(yīng)需求。對(duì)于制劑生產(chǎn)階段確需進(jìn)行原料藥混批的，應(yīng)開展充分的驗(yàn)證研究，根據(jù)驗(yàn)證情況明確混批原則（應(yīng)涵蓋混批批次數(shù)量、混合總量、混批所使用原料藥及混批后獲得工藝中間品的質(zhì)量要求等），應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》原料藥先進(jìn)先出的要求，不得隨意混批。不允許通過混批解決單批產(chǎn)品質(zhì)量問題，或采用不同工藝生產(chǎn)的原料藥混批進(jìn)行后續(xù)生產(chǎn)。中間體儲(chǔ)存考慮：胰島素類產(chǎn)品生產(chǎn)周期通常較長，可能涉及多個(gè)中間體儲(chǔ)存，此時(shí)應(yīng)開展中間體儲(chǔ)存穩(wěn)定性研究，并考慮多步中間體累計(jì)儲(chǔ)存對(duì)原料藥/制劑質(zhì)量的影響。在雙時(shí)相預(yù)混胰島素類產(chǎn)品的生產(chǎn)中，建議先將符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的原料藥混合、溶解，而后按等相點(diǎn)添加硫酸魚精蛋白制備成為均一的雙時(shí)相預(yù)混胰島素類產(chǎn)品。

六、質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)量研究應(yīng)全面深入地研究產(chǎn)品的質(zhì)量屬性，明確其關(guān)鍵質(zhì)量屬性，研究項(xiàng)目應(yīng)包括可能與其安全性、有效性相關(guān)的特性，并合理擬定原料藥和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目及限度。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)檢定方法應(yīng)根據(jù)藥典要求開展適當(dāng)?shù)姆椒▽W(xué)確認(rèn)或驗(yàn)證研究。

（一）質(zhì)量研究

應(yīng)采用多批次代表性樣品，在確保研究方法準(zhǔn)確、可靠的前提下，對(duì)樣品的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)和生物學(xué)活性展開研究。重點(diǎn)關(guān)注有關(guān)物質(zhì)和雜質(zhì)的殘留水平，盡可能對(duì)原料藥及制劑、有關(guān)物質(zhì)和雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)和生物學(xué)活性進(jìn)行全面表征。

1.結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)

結(jié)構(gòu)確證研究應(yīng)結(jié)合胰島素類產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選擇合理的研究手段，一般包括：一級(jí)結(jié)構(gòu)（質(zhì)譜分子量、氨基酸序列分析、肽圖、氨基酸覆蓋率、N-端序列、C-端序列、二硫鍵分析、游離巰基、等電點(diǎn)研究）、二級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)（紅外光譜、熒光光譜、遠(yuǎn)近紫外光譜的圓二色譜、熱穩(wěn)定性分析、動(dòng)態(tài)和靜態(tài)光散射）、修飾位點(diǎn)確認(rèn)（如有）等。推薦采用 X 射線單晶衍射等方法對(duì)產(chǎn)品的高級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。鼓勵(lì)采用核磁共振波譜法等方法對(duì)化學(xué)分子修飾的胰島素類產(chǎn)品進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。對(duì)德谷胰島素、地特胰島素等修飾類的長效胰島素，應(yīng)盡可能對(duì)其發(fā)揮作用相關(guān)的三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)，如胰島素六聚體和多六聚體進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證研究。理化性質(zhì)分析一般應(yīng)包括：性狀、鑒別、溶解度、等電點(diǎn)、吸光度、吸水性、含量、純度和雜質(zhì)、可見異物、不溶性微粒、劑量準(zhǔn)確度/可抽取體積等。對(duì)于注射筆包裝的制劑應(yīng)開展功能性研究，如啟動(dòng)力、滑動(dòng)力、注射時(shí)間等，必要時(shí)納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。 

2.雜質(zhì)

胰島素類產(chǎn)品工藝相關(guān)雜質(zhì)一般包括酶、溶劑、宿主蛋白殘留、宿主 DNA 殘留等，化學(xué)分子修飾胰島素產(chǎn)品的工藝相關(guān)雜質(zhì)還可能包括化學(xué)分子生產(chǎn)、修飾反應(yīng)引入的雜質(zhì)，應(yīng)關(guān)注雜質(zhì)的來源、去除及轉(zhuǎn)化情況、對(duì)殘留進(jìn)行必要的安全性評(píng)估。對(duì)于產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，按照新藥開發(fā)的胰島素類產(chǎn)品，原則上應(yīng)對(duì)所有超出 0.10%的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行鑒定、定量研究，對(duì)于超出 0.50%的單個(gè)產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行鑒定、定量及活性研究，結(jié)合臨床研究分析對(duì)安全性、有效性等的影響，并擬定合理的控制策略。按照生物類似藥開發(fā)時(shí)，應(yīng)采用足夠靈敏的分析方法與參照藥進(jìn)行頭對(duì)頭的對(duì)比分析。當(dāng)產(chǎn)品中出現(xiàn)與參照藥同時(shí)具有的同種雜質(zhì)，其含量原則上應(yīng)不高于參照藥。當(dāng)產(chǎn)品中出現(xiàn)參照藥中不存在的新雜質(zhì)，需進(jìn)行安全性評(píng)估，當(dāng)其含量超出 0.10%時(shí)，應(yīng)通過富集等方式進(jìn)行定性或/和定量研究。如雜質(zhì)中存在具有潛在的遺傳毒性的物質(zhì)，應(yīng)嚴(yán)格按照 ICH 相關(guān)指導(dǎo)原則對(duì)其進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

針對(duì)化學(xué)分子修飾胰島素產(chǎn)品，如地特胰島素、德谷胰島素等，應(yīng)對(duì)其側(cè)鏈脂肪鏈引入的雜質(zhì)（如空間異構(gòu)體、位置異構(gòu)體和手性異構(gòu)體）進(jìn)行充分的鑒定和研究，選擇靈敏、先進(jìn)、穩(wěn)定的分析方法（如質(zhì)譜、高效液相色譜等）進(jìn)行雜質(zhì)歸屬或者控制的研究，方法靈敏度應(yīng)與檢測(cè)目的、所論證的雜質(zhì)限度相匹配，提升對(duì)產(chǎn)品的認(rèn)知及質(zhì)量控制能力。

對(duì)復(fù)方制劑，應(yīng)建立分析方法檢測(cè)制劑（所有活性成分均存在時(shí)）中每個(gè)活性成分的含量、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)/有關(guān)物質(zhì)，可基于檢測(cè)目的的不同，采用不同的分析方法針對(duì)不同活性成分及雜質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，以盡可能確保復(fù)方制劑中雜質(zhì)被有效的檢測(cè)，合理擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其中產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)/有關(guān)物質(zhì)限度應(yīng)以產(chǎn)生該雜質(zhì)的活性成分的百分含量進(jìn)行計(jì)算（而不是占該制劑所有藥物活性成分總量的百分含量）。 

3.生物學(xué)活性

胰島素類產(chǎn)品除需參考《中國藥典》胰島素生物測(cè)定法外，還需開展胰島素受體結(jié)合力、胰島 β 細(xì)胞增殖（如適用）、受體磷酸化、代謝功能（葡萄糖攝取、脂肪合成、糖原合成等）等體外活性研究，申報(bào)臨床階段應(yīng)進(jìn)行初步研究，上市申報(bào)階段應(yīng)進(jìn)行全面的研究?；瘜W(xué)分子修飾胰島素類產(chǎn)品還應(yīng)關(guān)注其與人血白蛋白的親和活性研究。

4.方法學(xué)研究

準(zhǔn)確可靠的分析方法是質(zhì)量控制、穩(wěn)定性研究和可比性/相似性研究的重要基礎(chǔ)。分析方法應(yīng)經(jīng)過完整、規(guī)范的開發(fā)和驗(yàn)證，以所需的專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確性、精密度、檢測(cè)限、定量限、耐用性等性能，測(cè)量目標(biāo)分析物的一個(gè)或多個(gè)屬性。胰島素類產(chǎn)品應(yīng)在臨床試驗(yàn)申報(bào)前完成基本的方法學(xué)研究，伴隨研究的逐步深入，針對(duì)樣品和檢定方法的開發(fā)和驗(yàn)證應(yīng)持續(xù)推進(jìn)。如上市注冊(cè)申報(bào)階段應(yīng)采用影響因素/強(qiáng)制降解研究中分離、純化的有關(guān)物質(zhì)或雜質(zhì)開展必要的方法學(xué)研究，以確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

（二）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)建立原料藥和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。胰島素類產(chǎn)品的原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一般包括外觀、鑒別、純度及有關(guān)物質(zhì)、含量、高分子蛋白、生物學(xué)活性、干燥失重、細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度、工藝相關(guān)雜質(zhì)等；制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一般包括外觀、鑒別（活性成分及關(guān)鍵輔料）、純度及有關(guān)物質(zhì)、高分子蛋白、生物學(xué)活性、pH 值、關(guān)鍵輔料含量、細(xì)菌內(nèi)毒素、無菌、不溶性微粒、可見異物、可抽取體積/裝量等?？筛鶕?jù)生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制需要對(duì)不同工藝階段的樣品制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以確保其批間一致性。對(duì)于按生物類似藥開發(fā)的藥物，其原料藥和制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目及限度，應(yīng)不少于/不低于參照藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和《中國藥典》的有關(guān)要求。對(duì)于化學(xué)分子修飾胰島素類產(chǎn)品，還應(yīng)將化學(xué)分子修飾物和未修飾胰島素在標(biāo)準(zhǔn)中予以控制。對(duì)多劑量注射劑，應(yīng)納入劑量準(zhǔn)確度控制。對(duì)復(fù)方制劑，在原料藥階段對(duì)單方進(jìn)行質(zhì)量控制，單方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)不低于單組分制劑（若有）相關(guān)檢項(xiàng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)基于胰島素類產(chǎn)品特性進(jìn)行充分的質(zhì)量比對(duì)和量效關(guān)系研究，在充分研究數(shù)據(jù)積累的基礎(chǔ)上，綜合臨床前和臨床藥效學(xué)研究結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，明確含量與活性的關(guān)系，制定合理的含量活性轉(zhuǎn)換系數(shù)。此外，僅具有國際標(biāo)準(zhǔn)品的產(chǎn)品可以標(biāo)注為國際單位 IU，不可采取簡(jiǎn)單的類比推算轉(zhuǎn)化方法標(biāo)示為國際單位。若無國際或國家標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)建立企業(yè)內(nèi)部的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。對(duì)于臨床試驗(yàn)過程中不同工藝制備的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)進(jìn)行全面的表征和穩(wěn)定性考察，以確保不同階段的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可溯源。通常建議以確證性臨床的代表性工藝的批次或工藝驗(yàn)證的批次建立一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對(duì)一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行完全表征后，可以用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定工作標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。若擬采用體外活性試驗(yàn)代替體內(nèi)活性試驗(yàn)，則應(yīng)進(jìn)行全面的方法比對(duì)，開展體外、體內(nèi)檢測(cè)方法相關(guān)性研究。

七、穩(wěn)定性研究

胰島素類產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究應(yīng)參照生物制品穩(wěn)定性相關(guān)指南規(guī)范開展原料藥及制劑的穩(wěn)定性研究。采用至少3批次代表性批次原料藥和制劑，開展加速和長期穩(wěn)定性研究。采用至少 1 批次代表性批次原料藥和制劑，開展影響因素/強(qiáng)制降解研究。穩(wěn)定性研究樣品所采用的儲(chǔ)存容器應(yīng)與實(shí)際生產(chǎn)采用的儲(chǔ)存容器在材質(zhì)、封口方式等方面具有良好的代表性。臨床試驗(yàn)申報(bào)階段的穩(wěn)定性研究，應(yīng)能支持臨床試驗(yàn)的開展，至少完成3個(gè)月加速和3個(gè)月長期穩(wěn)定性研究。上市注冊(cè)申請(qǐng)階段，應(yīng)全面開展影響因素/強(qiáng)制降解、加速穩(wěn)定性和長期穩(wěn)定性研究，長期穩(wěn)定性研究時(shí)間應(yīng)能支持原料藥和制劑擬定的有效期。此外，還應(yīng)根據(jù)原料藥和制劑的實(shí)際生產(chǎn)場(chǎng)地及制劑的銷售區(qū)域，開展能滿足實(shí)際需求的運(yùn)輸穩(wěn)定性研究或運(yùn)輸性能驗(yàn)證。胰島素類產(chǎn)品應(yīng)開展模擬使用條件下的穩(wěn)定性研究，研究應(yīng)能覆蓋實(shí)際使用的最差條件，如有效期末期的制劑、最高使用頻率、最差放置條件（高溫、高濕、低溫、光照）等?？疾祉?xiàng)目應(yīng)能充分反映產(chǎn)品潛在的使用環(huán)境對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量屬性的潛在影響，如含量、純度、雜質(zhì)、無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素、不溶性微粒、抑菌劑含量及抑菌效力等。根據(jù)結(jié)果合理擬定制劑開啟后的使用條件。多劑量胰島素類產(chǎn)品中一般含有抑菌劑，為驗(yàn)證產(chǎn)品在長期穩(wěn)定性和模擬使用條件下的無菌保證能力，應(yīng)在長期穩(wěn)定性研究的關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn)和模擬使用條件下，參照《中國藥典》開展抑菌效力檢查，應(yīng)能證明有效期末期制劑使用過程中的微生物安全性。

胰島素類產(chǎn)品原料藥一般具有較長的有效期，因此，應(yīng)科學(xué)設(shè)計(jì)有效期末原料藥制備制劑的穩(wěn)定性考察方案，以支持經(jīng)歷較長時(shí)間儲(chǔ)存的原料藥仍能生產(chǎn)出具有相當(dāng)效期的制劑，并在上市申請(qǐng)的申報(bào)資料中提供上市后同步驗(yàn)證研究方案。

八、相似性研究

按照生物類似藥開發(fā)的胰島素類產(chǎn)品，應(yīng)開展相似性研究與評(píng)價(jià)，包括質(zhì)量相似性和穩(wěn)定性相似性。具體的技術(shù)要求可參考生物類似藥研發(fā)與評(píng)價(jià)相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則。按照不同階段、不同質(zhì)量屬性權(quán)重、分析方法變異度等采用符合要求的候選藥及參照藥開展相似性研究，關(guān)注候選藥及參照藥批次、來源、工藝和規(guī)模等。

胰島素類產(chǎn)品原料藥和制劑的質(zhì)量屬性一般存在差異，應(yīng)選擇制劑進(jìn)行相似性研究。當(dāng)需要對(duì)參照藥進(jìn)行前處理時(shí)，應(yīng)說明處理的具體步驟和操作方法，分析可能對(duì)參照藥產(chǎn)生的影響，必要時(shí)需對(duì)處理前、后的樣品進(jìn)行比對(duì)研究，應(yīng)考慮不同處方對(duì)制劑高級(jí)結(jié)構(gòu)表征的影響。此外，當(dāng)表達(dá)體系與參照藥不一致時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注雜質(zhì)譜中的潛在差異。

九、儲(chǔ)存容器和密閉系統(tǒng)

儲(chǔ)存容器和密閉系統(tǒng)一般包括與原料藥、半成品（如有）和制劑直接接觸的包材，緩沖液儲(chǔ)存容器，以及生產(chǎn)過程中與工藝中間品直接接觸的生產(chǎn)設(shè)備，如生物反應(yīng)袋、一次性管線等。為避免儲(chǔ)存容器或密閉系統(tǒng)對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量產(chǎn)生非預(yù)期影響，應(yīng)對(duì)其開展相容性研究、密閉性研究和有關(guān)安全性評(píng)估。對(duì)于與原料藥和制劑直接接觸的包材應(yīng)參照相關(guān)指導(dǎo)原則規(guī)范完成包材相容性和/或密封性研究。在上市注冊(cè)申報(bào)階段應(yīng)提供全面的可提取物和浸出物研究資料。對(duì)于使用硅油進(jìn)行硅化處理的預(yù)填充包裝制劑，應(yīng)關(guān)注硅油來源及質(zhì)量、硅化工藝的穩(wěn)健性，并結(jié)合臨床使用特點(diǎn)分析硅油對(duì)制劑質(zhì)量及安全性的影響。產(chǎn)品所使用硅油應(yīng)滿足藥用要求，并與制劑作為整體進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，上市許可持有人作為責(zé)任主體，應(yīng)按照相關(guān)技術(shù)要求，進(jìn)行供應(yīng)商審計(jì)。

對(duì)于多劑量胰島素類產(chǎn)品，所使用的多次給藥裝置應(yīng)滿足對(duì)藥品的安全性、適應(yīng)性、穩(wěn)定性、功能性、保護(hù)性和便利性的要求，并參照《中國藥典》和相關(guān)指導(dǎo)原則展開研究。建議特別關(guān)注筆式注射器與筆芯、所用針頭的適配性問題，對(duì)于企業(yè)獨(dú)立開發(fā)的筆式注射器或從供應(yīng)商處購買的相適配的筆式注射器，均應(yīng)對(duì)其與筆芯（卡式瓶）的匹配度和功能性等方面展開必要研究。

十、名詞解釋

有關(guān)物質(zhì)：在生產(chǎn)和/或貯藏中形成的預(yù)期產(chǎn)品的分子變異體,它們具有活性且對(duì)成品的安全性和有效性無有害影響。這些變異體與預(yù)期產(chǎn)品的屬性可比,不列為雜質(zhì)。

雜質(zhì)：存在于原液或成品中的非預(yù)期產(chǎn)品、非產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)或非輔料（包括緩沖液成分）的任何組分,它的存在與工藝或產(chǎn)品有關(guān)。雙時(shí)相預(yù)混胰島素：兩種不同起效時(shí)間和作用時(shí)間的胰島素成分在灌裝前以一定比例混合制備成的預(yù)混型胰島素制劑。

等相點(diǎn)：使一定量的胰島素完全被結(jié)合形成沉淀的最小魚精蛋白量。

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來源：CDE

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